Um kit de ensaio de adenosina desaminase de alta qualidade

A adenosina desaminase (ADA) é uma enzima natural que está envolvida na resposta imunológica. A função do Difosfato de Adenosina (ADP) é ativar as células e realizar a permeabilização da membrana e efeito citotóxico. A adenosina foi identificada como um dos aminoácidos mais importantes necessários para a atividade normal do cérebro humano. É sintetizado pelo fígado e distribuído no plasma sanguíneo por meio de ações do sistema imunológico. O Difosfato de Adenosina é um transportador do material genético antiviral. Na Biomedical Expo, o kit ADA Activity Assay será usado em combinação com a citocina BioVision mencionada anteriormente.

O difosfato de adenosina (ADP) é um transportador do fator de crescimento de linfócitos T. No BioVision Cytokine, a adenosina desaminase (ADO) é extraída do rim dissecado e analisada usando ensaio espectrofotométrico automatizado disponível comercialmente. O reagente foi pré-tratado com anti-fosfo-dGlucose (PI) para evitar sua reação com o analito.

A composição do Kit de Ensaio de Atividade AIDA disponível comercialmente inclui dois componentes principais - o reagente e o equipamento de laboratório. Os reagentes contidos no kit Aida Activity Assay incluem coquetel de enzimas purificadas (Sigma-FCA). O equipamento de laboratório consiste em um scanner de microplacas (montado atrás de uma lâmina de microscópio de vidro), vidraria, livro de resultados de curva padrão e frasco de enxágue. Antes da utilização, as amostras do Kit Aida Activity Assay devem ser lavadas com água sem cloro. O uso de reagentes e equipamentos de laboratório não se restringe apenas a testes laboratoriais.

Para examinar a capacidade do Aida Activity Assay Kit para medir a atividade total da adenosina desaminase, foram realizadas várias sessões experimentais. A primeira sessão consistiu em quatro dias de rastreamento manual. Cento e cinquenta microlitros de Aida-GFP foram dissolvidos em água da torneira e misturados com solução salina tamponada com fosfato. Após vinte minutos, as amostras foram testadas na tela de balanço de massa de HPLC.

A segunda sessão incluiu dois dias adicionais de rastreamento manual. As amostras foram injetadas no cassete de curva durante duas horas conforme descrito acima. A terceira sessão incluiu três dias adicionais de rastreamento manual na mesma sala, seguidos de quatro horas de injeções subcutâneas de adenosina desaminase (ADCA). A amostra de sangue foi coletada após uma hora para análise.

Para o teste de saliva, quinhentos microlitros de soluções padrão de desaminase e pH rosa foram misturados em um punch não estéril. Os porcos puderam beber uma grande variedade de líquidos, desde água pura até refrigerante diet, conforme desejado. Quando as soluções padrão atingiram o ponto de ebulição, um conta-gotas com volume pré-determinado de saliva foi inserido e a atividade da adenosina desaminase foi medida.

O último grupo de seis amostras foi analisado utilizando um kit de ensaio de fosforimidazolamina à base de saliva disponível comercialmente (Saproflavil; Thermo Instruments). Neste conjunto de ensaios, uma única gota de reagente Fosforimidazolamina/ada salivar foi misturada com um volume de água da torneira e o pó seco foi adicionado às amostras. Após trinta minutos, foi retirada uma segunda amostra da mesma amostra. Neste caso, a atividade na saliva foi medida imediatamente. O kit foi projetado especificamente para medir a atividade do ácido na saliva humana. Como esperado, houve uma quantidade significativa de atividade que pôde ser detectada.

Como esperado, ambos os analisadores produziram resultados semelhantes. A natureza altamente específica da análise da tomografia por emissão de pósitrons salivares (SPECT), juntamente com a metodologia altamente sensível (alta detecção de fluido intraoral), resultou em precisão consistentemente alta e medições significativas. O pessoal do laboratório utilizado para os procedimentos eram todos especialistas na área. Não houve evidência de contaminação, ou de qualquer tipo de erro experimental. Os sujeitos do teste deram consentimento informado e o procedimento seguiu as recomendações estabelecidas pela Associação Americana de Endocrinologistas Clínicos. No geral, os resultados obtidos com o Kit de Ensaio de Adenosina Deaminase mostraram boa reprodutibilidade, o que foi confirmado por estudos separados de laboratórios clínicos independentes.